RESUMEN
Nos propusimos realizar un estudio de los posibles efectos teratogénico y abortivo de la Sheilina en crías de rata Sprague Dawley. En el estudio teratogénico se utilizaron 80 hembras gestadas, divididas en cuatro grupos, tres experimentales que reciben el producto a dosis de 350 mg/kg, 150 mg/kg y 50 mg/kg respectivamente durante el periodo de organogénesis y un grupo control que recibe suero fisiológico, para el estudio abortivo se usan 60 hembras gestadas divididas en cuatro grupos, dos experimentales que reciben la dosis máxima del producto en los días 2 o 4 de la preñez y dos grupos controles que reciben suero fisiológico.

No se encontraron malformaciones esqueléticas, las viscerales se corresponden con las malformaciones espontáneas de esta línea de ratas y no hubo afectaciones en los índices de implantación y de reabsorción, ni en el crecimiento intrauterino de las crías. Se concluye que el producto utilizado no provoca malformaciones ni es abortivo en esta línea de ratas.

PALABRAS CLAVES: estudio teratogénico, estudio abortivo, hipoglicemiante oral, ratas sprague dawley.

INTRODUCCIÓN
Durante mucho tiempo la Petiveria Alliacea (Anamú) ha sido utilizada como remedio popular1,2,3 atribuyéndosele acción antimicrobiana4 y efecto regenerativo sobre úlceras de estómago5, además se ha utilizado en tratamientos médicos en enfermedades como la osteoartritis de cadera y rodilla6, hiperplasia benigna de próstata7 y en la soriasis8, también se reporta su acción anticancerosas9,10. Juan Tomás Roig plantea que a esta planta se le atribuyen propiedades hipoglicemiantes, abortivas y antinflamatorias3, en Brasil se reportan estudios de los efectos abortivos de la misma11, 12.
El uso popular del Anamú como hipoglicemiante, estimuló la realización de investigaciones que condujeron a la obtención de un principio activo con efecto hipoglicemiante en las hojas y tallos no leñosos de la planta13,14, que se obtiene según el método descrito en la patente correspondiente15 y que recibió el nombre de Sheilina.

El efecto hipoglicemiante de Sheilina, fue evaluado en biomodelos de ratones Balb-c, ratas Sprague Dawley, conejos y perros Beagles, donde se usaron animales normoglicémicos y con diabetes inducida por diferentes técnicas (9). Se realizaron además estudios toxicológicos que permitieron el cálculo de la dosis letal 50, así como estudios histológicos en hígado, páncreas, bazo, riñón, pulmones, corazón e intestino donde no se encontraron diferencias entre los animales tratados y los controles13,16.

Tomando en consideración que en la bibliografía consultada no se ha encontrado ninguna referencia donde se realicen estudios teratogénicos de la planta, nos propusimos realizar un estudio de los posibles efectos teratogénico y abortivo de la Sheilina.

MATERIAL Y MÉTODO
El estudio se realizó utilizando 140 ratas Sprague Dawley hembras, vírgenes, adultas con un peso aproximado entre 180 y 210 gramos, procedentes del Centro Nacional de Producción de Animales de Laboratorio y 40 machos de fertilidad probada de la misma línea y procedencia. El apareamiento se realiza en la noche a razón de dos hembras por macho, comprobándose la cópula por lavado vaginal con suero fisiológico que se observa al microscopio óptico, tomándose la presencia de espermatozoides en la lámina como día cero de la gestación. Las ratas gestadas se mantienen en cajas independientes con libre acceso al agua y la comida con un ritmo de 12 horas de luz y oscuridad y son pesadas en días alternos. El estudio consta de dos experiencias: la determinación del efecto teratogénico y el estudio del efecto abortivo.

Para el estudio del efecto teratogénico se escogen al azar 80 madres que se distribuyen en los grupos A, B, C y D (n= 20), los que reciben 350 mg/kg, 150 mg/kg y 50 mg/kg de Sheilina los tres primeros y suero fisiológico el cuarto desde el día 8 hasta el día 14 de la gestación, por vía oral mediante intubación esofágica.
En el día 19 de la gestación, después de muertas en una atmósfera de éter, a las madres se les realiza laparotomía, se exponen ambos cuernos uterinos y se cuenta el número de fetos viables así como las reabsorciones existentes. Se obtienen las crías viables, las que son lavadas con suero fisiológico y secadas sobre papel de filtro.

Las crías de cada grupo estudiado se pesan en una balanza digital, se tallan sobre papel milimetrado y se constata la presencia o no de malformaciones congénitas externas por observación visual. Posteriormente son distribuidas de manera aleatoria y la mitad son fijados en solución de Bouin para ser analizados utilizando la técnica de los cortes de Wilson17 buscando la presencia de malformaciones internas mediante la observación directa en el microscopio estereoscópico y la otra mitad se fija en Etanol al 70 % y son procesados mediante la técnica de Dawson18 buscando la presencia de malformaciones esqueléticas.

Para la evaluación del efecto abortivo se utilizan las 60 ratas gestadas restantes; con ellas se forman dos grupos experimentales y dos controles de 15 madres cada uno. A los grupos experimentales se le administra en el día 2 a un grupo y en el día 4 al otro, una dosis única de 350 mg/kg del medicamento y a los controles se les administra en igual período una dosis similar de suero fisiológico.

Las madres de estos cuatro grupos se matan, en iguales condiciones a las descritas anteriormente, en el día 14 de la gestación y mediante laparotomía se exponen ambos cuernos uterinos para contar número de reabsorciones y número de crías, además se extraen ambos ovarios y mediante observación en el microscopio estereoscópico se cuenta la cantidad de cuerpos lúteos. Con estos datos se calcula el Índice de implantación (ii) y el Índice de reabsorciones (ir) según las fórmulas siguientes.
ii= implantes / cuerpos lúteos x 100
ir= reabsorciones / implantes x 100

Para la determinación del efecto teratogénico se utilizó una prueba de comparación de una proporción (prueba z). La comparación de las variables número de crías, cuerpos lúteos, número de reabsorciones y número de implantes así como el análisis del peso y la talla de las crías se realiza utilizando como medidas de tendencia central la media y la desviación estándar (DE) y para la comparación de las medias se utilizó la prueba t de studens. El análisis del estudio abortivo se hace utilizando una prueba de comparación de dos proporciones (prueba z). Se consideró un resultado estadísticamente no significativo cuando la probabilidad asociada al valor del estadígrafo fue mayor o igual a 0.05.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Estudio Teratogénico
La administración del hipoglicemiante oral durante el periodo de la organogénesis no provocó efectos secundarios en los animales tratados, aun en aquellos que recibieron la dosis máxima, situación que habla a favor de la baja toxicidad del producto.

Tabla 1. Ganancia de peso materna. Estudio teratogénico.

n= 20

La ganancia de peso en las ratas incluidas fue adecuada para esta especie y para el tiempo de gestación que incluye el experimento como puede observarse en la tabla 1, estos resultados no muestran diferencias significativas.

Se reporta que cuando el producto administrado ejerce alguna toxicidad, la ganancia de peso de la madre disminuye19. En este estudio se observa que la ganancia de peso en el grupo experimental donde se utiliza una dosis máxima del medicamento es superior a la ganancia de peso en el grupo control, esto se interpreta por el hecho que el efecto hipoglicemiante aumenta las necesidades nutricionales de la madre lo que repercute en su ganancia de peso. Los valores de ganancia de peso en todos los grupos estudiados indica que esta variable no está influenciada por la administración del medicamento.

Tabla 2. Número de crías y cuerpos lúteos. Estudio teratogénico.

n= 20

El número de crías y de cuerpos lúteos (tabla 2), muestra valores semejantes entre ellos y las variables número de reabsorciones y de implantes (tabla 3) no muestran valores significativos estadísticamente.

Tabla 3. Número de reabsorciones y de implantes. Estudio teratogénico.

n= 20

El análisis estadístico del número de crías con respecto al total implantados (número de implantes), demuestra que la cantidad de embriones concebidos que se pierde (número de reabsorciones) es similar en cada grupo experimental con respecto al control, lo que indica la no existencia de efectos dañinos del producto utilizado sobre la viabilidad de las crías.

En estudios de toxicidad del desarrollo en ratas, donde se utilizan productos obtenidos del Anamú, donde ser reportan efectos embriotóxicos de la fracción soluble en agua obtenida como producto total de las hojas de la planta11, en otros trabajos14 ser reporta que los extractos totales de la planta contienen al menos diez principios activos hidrosolubles, en dependencia de la época del año, el producto utilizado es uno de esos principios activos, el cual al parecer no tiene efecto embriotóxico.

Tabla 4. Peso y talla de las crías por grupo. Estudio teratogénico.


El estudio de las variables morfométricas peso y talla tampoco mostró diferencias significativas entre grupos, se puede destacar que los valores del grupo experimental que recibió dosis máxima como tratamiento fueron ligeramente superiores a los controles (tabla 4)

Las crías incluidas en este estudio tuvieron peso y talla adecuado a la edad en que se obtienen, sin encontrarse diferencias significativas entre los grupos experimentales y controles, lo que sugiere que no hay efectos adversos, imputables al producto administrado que afecte las variables morfométricas estudiadas; existen reportes de estudios teratogénicos en otros medicamentos, donde se ha encontrado que los valores de peso y talla disminuyen a medida que aumenta la dosis20, no encontramos referencias de estudios similares donde se utilicen productos obtenidos de la Petiveria Alliacea.

No se encuentran malformaciones esqueléticas en ningún grupo y entre las malformaciones macroscópicas sólo se evidencia la presencia de fisurado palatino y ventrículos cerebrales dilatados en un pequeño número de la muestra en cada grupo, estos datos no muestran diferencias significativas y se encuentran en la tabla 5.

Tabla 5. Tipos de malformaciones viscerales encontradas.


Las malformaciones macroscópicas encontradas no alcanzan en ningún caso el 3 % de la muestra, estos datos coinciden con los datos descritos como malformaciones espontáneas para esta especie19. En el estudio esquelético no se encontraron malformaciones de ningún tipo.
Estudio Abortivo
El análisis estadístico de los datos referidos a la cantidad de crías y al número de cuerpos lúteos se muestra en la tabla 6, los datos del número de implantes y de reabsorciones (tabla 7), muestran que no hay diferencias entre los grupos experimentales y los controles.

Tabla 6. Número de crías y cuerpos lúteos. Estudio abortivo.


Tabla 7. Número de reabsorciones y de implantes. Estudio abortivo.


Los datos que expresan los posibles efectos cigotóxico y/o embriotóxico del producto administrado, dados por los índices de reabsorciones y de implantación (tabla 8), muestran valores que son similares y no significativos entre los grupos experimentales y controles.

Tabla 8. Índice de implantes y de reabsorciones. Estudio abortivo.


Los índices de implantación y de reabsorciones son medidas indirectas de la viabilidad del cigoto, su proceso de implantación y el desarrollo embrionario. El primero informa sobre los cigotos que se implantaron o que se perdieron en el trayecto desde el sito de fecundación hasta el lugar de implantación, en tanto que el segundo informa sobre el desarrollo del embrión a partir de su implantación12.

El estudio reportado por Oliveira y Peters en Brasil11, reporta alteraciones en el índice de implantación cuando utilizan la fracción soluble en agua del extracto de Anamú, en el día 5 de la gestación. La administración de Sheilina en el día 2 o en el día 4 de la gestación no muestra alteraciones en el índice de de implantación, pues se encuentran valores por encima del 95 % en los cuatro grupos estudiados, lo cual parece indicar que el producto no tiene efecto cigotóxico.
Los índices de reabsorciones encontrados en este estudio son inferiores al 5 % en todos los grupos, este resultado sustenta la hipótesis de que el producto no es cigotóxico porque además de encontrar un índice de implantación elevado, vemos que el índice de reabsorciones, lo que indicaría un desarrollo embrionario inadecuado, tiene valores realmente bajos.

CONCLUSIONES
1. La Sheilina administrada a ratas gestadas durante el periodo de organogénesis no afecta la ganancia de peso de las madres, el peso y talla de las crías ni provoca malformaciones congénitas.
2. La Sheilina administrada a dosis elevadas en los días iniciales de la gestación no tiene efecto abortivo en ratas Sprague Dawley.

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AUTOR
Dr. Orlando Tomé López.
E-mail: orlando.tome@infomed.sld.cu
Especialista de segundo grado en Embriología.
Profesor Auxiliar. Master en Educación Médica. I.C.B.P “Victoria de Girón”
Dirección: Zapata No. 2018 Apto. 2 e/18 y 20. Plaza de la Revolución. C.P 10400.
Ciudad de la Habana, Cuba.

Enviado por Dr. Orlando Tomé López.
Contactar mailto:orlando.tome@infomed.sld.cu

Código ISPN de la Publicación: EEAEpklVZuZRhWJlXc
Publicado Friday 28 de September de 2007