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Indice Gochez Alberto Martín; Spagnolo Emiliano; Peres Luis
Orlando; Peralta Nazareno; Najle Sebastian El objetivo de nuestra investigación, fue medir el rango de
viabilidad de embriones de Bufo paracnemis en las concentraciones de formol y
dicromato se debió primeramente reconocer las principales características del
aparato reproductor y ensayar la manipulación de gametas y fecundación
asistida en los citados anfibios. En nuestro trabajo hacemos un seguimiento a las fases de la
ontogenia que se pueden visualizar externamente controlando ciertos factores
externos tales como pH, temperatura, cantidad de huevos por cubeta, composición
química del solvente, por lo que analizamos el tiempo de crecimiento, el estadío
alcanzado, el porcentaje de muertos, y el patrón normal de desarrollo si los
factores no difieren mucho, de los encontrados por la naturaleza; con lo cual
analizamos el crecimiento de los huevos bajo cambios en la composición química
del solvente en cubetas de concentraciones graduales de formol y dicromato de
potasio, y calculamos el número de ovocitos muertos y estadío alcanzado. Suponemos que los estadíos de desarrollo de B. paracnemis
serán similares a los de B. arenarum. La mortalidad de los embriones expuestos a un agente químico
será directamente proporcional a la concentración del mismo. La velocidad de desarrollo de los embriones expuestos a un
agente químico será igual a la observada en el control. Hasta el presente no hay demasiados trabajos sobre la biología
de Bufo paracnemis, y mucho menos sobre su desarrollo embriológico. Esto se ve
reflejado en lo dificultoso que resultó hallar bibliografía sobre este
anfibio. Por lo tanto se considera de particular importancia la realización de
esta experiencia como aporte al conocimiento del desarrollo embrionario de Bufo
paracnemis y los factores que interfieren en el mismo. En este caso se
utilizaron soluciones de formol y dicromato de potasio que son considerados como
mutágenos químicos (Lacadena, J. R., 1989) Las características morfológicas y ecológicas del material
biológico en estudio son las siguientes: Bufo paracnemis es un anfibio robusto, con cabeza ancha,
hocico redondeado, casi triangular. Crestas cefálicas muy fuertes y abultadas.
Ojo mediano, con un pliegue sobre el párpado superior. Tímpano visible.
Parotoides muy grandes y abultadas, aguzandose posteriormente. Machos con patas
delanteras desarrolladas, mano con reborde cutáneo; tubérculos metacarpales
desarrollados; los subarticulares semidivididos. Pie con membrana interdigital
hasta 1/3 y reborde cutáneo; tubérculo metatarsal interno en forma de azada,
el externo redondeado. Pliegue tarsal afilado. Piel dorsal áspera, con verrugas
romas con puntas córneas, vientre con gránulos poligonales con punta espinosa.
Glándula paracnemis (tibia) grande. Macho con saco vocal externo poco visible y
cayosidades nupciales oscuras. Dorso amarronado o amarillento con manchas marrón
oscuro brillante, transversales. Parotoides rodeadas por machas oscuras
alargadas. Manchas oscuras borrosas en extremidades. Vientre y garganta
blancuzcos, densamente salpicados de oscuro. El tamaño promedio del adulto es
de 210 mm (W. S. Monografía 2, 1980). El sistema urogenital de este anfibio comparte las características
comunes a los de todos los anuros (ver figura 1), (Pirlot, P, 1976) 2. Morfologia externa de Bufo paracnemis.
Reproducción: desde primavera temprana hasta verano tardío. Los huevos son puestos en largas ristras gelatinosas adheridas a plantas acuáticas. Renacuajo: dorso gris azulado. Vientre blancuzco. Aleta dorsal mas clara, casi opaca. Cola levemente mas larga que la mitad del largo total. Ojos grandes, prominentes. Fórmula dentaria 1,1-1/1-1,2. Distribución: desde Jujuy hasta Córdoba y Santa Fe, Corrientes, Entre Rios y Misiones (ver anexo 1, figura 2) .Además en ambientes secos de Bolivia, Paraguay y Brasil hasta Pernambuco (W. S. Monografía 2, 1980). Su ubicación taxonómica es la siguiente: Clase: Amphibia Subclase: Lissamphibia Orden: Anuro Superfamília: Bufonoidea Familia: Bufonidae Grupo: Marinus Género y especie: Bufo paracnemis (De Lucía, A; comunicación oral, 1999). Dos días antes del comienzo de la experiencia fueron colectados ejemplares macho y hembra de Bufo paracnemis, los cuales se trasladaron al laboratorio del área Morfología y Fisiología para que se les suministre a las hembras una suspensión hipofisiaria (según el protocolo de Houssay, 1929) para inducir la ovulación. Pasadas las doce horas, las hembras comenzaron a ovular, tras haberse iniciado esto se desmedularon tanto los ejemplares hembra como machos. A estos últimos se los disecó para extraerles los testículos, los cuales fueron seccionados y macerados en 1 ml de solución Ringer al 10 % (ver anexo 1, tabla 1), retirando luego con una pinza los sobrantes de tejido y para obtener así la suspensión espermática. Se colocaron los ovocitos contenidos en un ovisaco de una de las hembras en una caja de Petri (perfectamente limpia y seca), y se les agregó luego una primer dosis de suspensión espermática. Transcurridos 10 minutos se agregó 1 ml de solución de Ringer, al minuto siguiente se agregó la segunda dosis de suspención espermática preparada a partir del otro testículo del macho. Quince minutos mas tarde fueron colocados los ovocitos fecundados en un recipiente plástico, translúcido, de medidas 25 x 12 x 5 cm., para luego ser cubiertos totalmente con solución Ringer. Simultáneamente se prepararon dos cubeteras de plástico conteniendo soluciones de concentraciones decrecientes de formol y dicromato de potasio. Estas soluciones de diferente concentración fueron ordenadas de a pares en los recipientes de las cubeteras, de forma que dos recipientes contenían la misma concentración de agente químico (ver figuras). Sol. De Ringer Tris HCl 10% (pH 7,5):
Figura 2: Distribución de las soluciones en las cubeteras.
Cubetera Con Formol Concentraciones: 1: 4% 2: 2% 3: 1% 4: 0,4% 5: 0,04% 6: 0,004%
Cubetera CON K2Cr2O7 Concentraciones: 1: 0,00003 gr/l 2: 0,0003 gr/l 3: 0,003 gr/l 4: 0,03 gr/l 5: 0,3 gr/l 6: 3 gr/l Vale aclarar que los embriones no cumplimentaron su desarrollo en el medio conteniendo los agentes químicos, sino que este medio fue reemplazado a las 10 horas desde la inseminación por solución de Ringer, ya que la solución inicial sufrió una evaporación excesiva. De igual modo, tanto las soluciones Ringer de las cubeteras como la del control se reemplazaron periódicamente para renovar el suministro de nutrientes y evitar la putrefacción del medio. Cuando los embriones alcanzaron el estadío de "boca abierta" fueron alimentados con hojas de lechuga (Lactuca sativa) y con hojas de una planta acuática hervidas. Los datos registrados durante la experiencia fueron: registros de temperatura ,con termómetro de mercurio; de pH con tiras indicadoras de diferentes marcas; porcentaje de muertos por recipiente de cría y estadío máximo alcanzado al tiempo de muestreo. Periódicamente se tomaron muestras representativas de todos los recipientes que fueron fijadas y conservadas en formol al 4%. Estas muestras fueron tomadas a distintos intervalos de tiempo que fueron predeterminados (ver tabla ).
Los esquemas fueron realizados a mano alzada, con lupa Kyowa a 30x y 40x. Las tablas fueron realizadas con el programa Excel 98. 6. Resultados El pH no varió significativamente a lo largo de la experiencia, estas pequeñas variaciones se atribuyeron a que se utilizaron distintas marcas de tiras indicadoras. La temperatura osciló entre los 18 y 27 ºC, presentando una media a lo largo de la semana de 23 ºC. La mínima se registró a las 22 horas de desarrollo y la máxima a las 123 h. Cuba control. Se comenzó la experiencia con 2100 ovocitos (calculados con método de muestreo). El porcentaje de mortalidad se mantuvo entre el 5 y el 14 % hasta las 55 horas, pasadas las cuales se registró un 90% de mortalidad a las 75 horas, para mantenerse luego entre el 20 y 29 % (ver tabla). Luego de las 166 horas ha sobrevivido el 1,2 % de los embriones de la cuba control. Cubetera con dicromato de potasio.
Cubetera con dicromato de potasio: Porcentaje de mortalidad: Cuba número 1: 41% de muertos Cuba número 2: 72 % de muertos Cuba número 3: 45% de muertos Cuba número 4: 60 % de muertos Cuba número 5: 100 % de muertos Cuba número 6: 100 % de muertos (ver tabla).
Cubetera con formol: Porcentaje de mortalidad: Cuba 1,2,3 y 4 quedaron fijadas. Cuba 5 y cuba 6 presentaron un 43 % de mortandad. (ver tabla).
En la cubeta control el último estadío observado luego de
las 166 horas de trabajo fue el de pliegue opercular. Cabrera; Maluquer; Lozano. Historia Natural Tomo I: Zoología. 5º Edición,
Inst. Callach de Lib. y ediciones. Barcelona. 1966. Autor: Emiliano José Spagnolo amghotam@hotmail.com
Enviado por Emiliano José Spagnolo
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